Comportamento de eixos embrionários de Araucária angustifolia Bertol (O. Kuntze) após a criopreservação, usando o método de encapsulamento-desidratação

Abstract

Resumo: Araucaria angustifolia Bertol Kuntze é uma das espécies nativas de maior importância econômica e ecológica para a região sul do Brasil. A natureza recalcitrante da espécie dificulta a conservação em longo prazo de suas sementes, sendo a criopreservação a forma de conservação mais apropriada. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o comportamento de eixos embrionários de araucária mediante aplicação da metodologia de criopreservação por encapsulamento e desidratação. Para tanto, eixos embrionários excisados das sementes foram encapsulados e desidratados, sendo submetidos a dois métodos de criopreservação: o congelamento rápido e o pré-resfriamento a -40oC seguido do congelamento em nitrogênio liquido. Os eixos embrionários foram criopreservados por duas horas e, em seguida, foram descongelados rapidamente, cultivados in vitro e foram realizadas as análises da integridade do DNA, germinação in vitro, oxidação e o teste de tetrazólio. Foram avaliados o número de eixos embrionários germinados, a formação de calos e o aspecto oxidado. Após a criopreservação, não ocorreu a degradação do DNA dos eixos criopreservados e, pelo teste de tetrazólio, a maioria dos eixos embrionários que foram criopreservados pelo método de congelamento rápido apresentou o mesmo aspecto dos eixos embrionários não criopreservados, enquanto os eixos submetidos ao congelamento moderado tinham coloração vermelha mais escura quando comparados com os demais. Todos os eixos apresentaram aspecto de oxidação, porém 68,57% dos que foram congelados rapidamente tiveram oxidação, enquanto que a percentagem dos pré-resfriados oxidados foi de 10,80%, com aspecto de total deterioração. Não houve germinação in vitro dos eixos embrionários criopreservados. O método de encapsulamento e desidratação é promissor para criopreservação de eixos embrionários de araucária e se faz necessária a continuação dos estudos para a definição de um método de criopreservação dos eixos embrionários que permita sua germinação posterior.

Abstract: Araucaria angustifolia Bertol Kuntze is one of the native species of greatest economic and ecological importance to the southern region of Brazil. The recalcitrant nature of the species hampers the long-term conservation of its seeds, being the cryopreservation the most appropriate conservation method. The purpose of this study was to evaluate the behavior of embryonic axes of Araucaria upon application of cryopreservation methods for encapsulation and dehydration. Embryonic axes, excised from seeds, were encapsulated and dehydrated, being subjected to two methods of cryopreservation: fast freezing and pre-cooling at -40oC followed by freezing in liquid nitrogen. The embryonic axes were cryopreserved for two hours and then were thawed rapidly, grown in vitro and analyses of DNA integrity, in vitro germination, oxidation and the tetrazolium test were carried out. The number of germinated axes, the embryonic callus formation and the oxidized aspect of axes were evaluated. After cryopreservation, DNA degradation of axes did not occur. The tetrazolium test showed that most of the embryonic axes that had been cryogenically preserved by quick-freezing method presented the same aspect as the cryopreserved axes, while those subjected to moderate freezing presented a darker red colour when compared with others. All axes presented aspect of oxidation, but those that were quickly frozen had a higher percentage of oxidation (68.57%) while the pre-chilled presented 10.80% and aspect of total deterioration. There was no germination in vitro of cryopreserved embryonic axes. The method of encapsulation and dehydration is promising for cryopreservation of embryonic axes of Araucaria but it is necessary to carry out new studies in order to define a method of cryoconservation of embryonic axes that allows their germination.