Análise do perfil de expressão gênica de linfócitos T CD4+ aplicada ao estudo da doença autoimune pênfigo foliáceo endêmico.

Abstract

Resumo: O pênfigo foliáceo (PF) é uma doença auto-imune complexa caracterizada por bolhas intra-epidérmicas e pela presença de anticorpos contra a desmogleína 1. A autoimunidade resulta em perda de adesão entre os queratinócitos, um processo denominado acantólise. A etiologia do PF ainda é pouco conhecida. Com o objetivo de identificar alterações moleculares que participem da patogenia da doença utilizou-se a tecnologia de microarranjos de oligonucleotídeos para analisar o perfil de expressão gênica diferencial entre linfócitos T CD4+ isolados de sangue periférico de pacientes e controles, e PCR em tempo real para analisar um conjunto de genes de interesse em biópsias de pele de tecido lesionado e não-lesionado de pacientes. Os linfócitos foram purificados em colunas magnéticas e os ensaios foram realizados com microarranjos comerciais que contém sondas representativas do genoma humano total. Várias comparações entre subgrupos de pacientes foram realizadas. Ao comparar-se o perfil de expressão gênica diferencial entre linfócitos de pacientes com a forma generalizada da doença e sem tratamento imunossupressor com linfócitos de indivíduos controles foram identificados 135 genes diferencialmente expressos (122 induzidos e 13 reprimidos nos pacientes). Ao comparar-se o perfil de expressão gênica diferencial entre linfócitos de pacientes com a forma generalizada da doença sem tratamento com linfócitos de pacientes com a forma generalizada sob tratamento imunossupressor 55 genes diferencialmente expressos foram identificados, sendo 41 reprimidos e 14 induzidos nos pacientes sob tratamento. Ao comparar-se o perfil de expressão gênica diferencial entre linfócitos de pacientes com a forma generalizada da doença com linfócitos de pacientes com a forma localizada da doença foram identificados 65 genes diferencialmente expressos (49 induzidos e 16 reprimidos nos pacientes com a forma generalizada). Já ao comparar-se o perfil de expressão gênica diferencial de linfócitos de pacientes com pênfigo foliáceo e pacientes com pênfigo vulgar, uma forma de pênfigo mais grave, em relação aos controles, verificou-se que estas duas doenças compartilham aproximadamente 30% dos genes diferencialmente expressos. Os genes identificados como diferencialmente expressos em todas as comparações são principalmente relacionados com adesão e migração de linfócitos, apoptose, proliferação celular e apresentação de antígenos. A região cromossômica 19q13 contém o maior número de genes diferencialmente expressos e pode ser considerada uma região candidata a conter genes de susceptibilidade ao PF. Nas biópsias de pele de tecido lesionado e não-lesionado de pacientes, os genes encontrados como diferencialmente expressos são característicos do envolvimento de células T reguladoras, implicando a participação deste tipo celular no controle da doença. Estes resultados adicionam informações originais que contribuem para a compreensão da patogenia do pênfigo foliáceo.

Abstract: Pemphigus foliaceus (PF) is a complex autoimmune disease characterized by skin bullous and presence of antibodies against desmoglein 1. Autoimmunity results in loss of adhesion among keratinocytes (acantholysis). The etiology of PF is poorly understood. Aiming to identify molecular alterations that participate in the pathogenic process of the disease, we used the technology of oligonucleotides microarrays to analyze differential gene expression between T CD4+ lymphocytes isolated of peripheral blood of patients and controls, and real time PCR to analyze a set of genes in lesion skin and health skin biopsies of patients. Lymphocytes were purified by magnetic beads and the assays were made with whole genome commercial microarrays. A number of comparisons between subgroups of patients were made. When gene expression was compared between lymphocytes derived from untreated patients carrying the generalized form of the disease with lymphocytes derived from healthy individuals, 135 genes were found to be differentially expressed (122 up-regulated and 13 down-regulated in patients). Comparing gene expression between lymphocytes derived from untreated patients carrying the generalized form of the disease with lymphocytes derived from patients submitted to immunosuppressive treatment, 55 genes were found to be differentially expressed (41 down-regulated and 14 up-regulated in patients submitted to treatment). When gene expression profiles were compared between lymphocytes derived from patients carrying the generalized form of the disease with lymphocytes derived from patients carrying the localized form, 65 genes were differentially expressed (49 up-regulated and 16 down-regulated in patients carrying the generalized form). When lymphocytes of PF patients were compared with those of pemphigus vulgaris patients, approximately 30% of the differentially expressed genes were shared by both diseases. Genes identified like differentially expressed in all comparisons are related with lymphocytes adhesion and migration, apoptosis, cellular proliferation and antigen presentation. Chromosomal region 19q31 contains the greatest number of differentially expressed genes and could be considered a candidate region to have susceptibility genes to PF. Genes found to be differentially expressed between lesion skin and health skin biopsies of patients are characteristic of regulatory T cells, suggesting the participation of this cellular type on disease control. These results add original information that contributes to the understanding of pemphigus foliaceus pathogenesis.