Comparação dos diagnósticos sorológico e molecular da leptospirose humana na região metropolitana de Curitiba, Paraná

Abstract

A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial que apresenta sintomas clínicos não-específicos, cujo diagnóstico definitivo depende de testes laboratoriais. Amostras de sangue total, plasma e soro contaminadas in vitro foram submetidas à PCR em sistemas monoplex e duplex, utilizando dois conjuntos de iniciadores previamente descritos (G1/G2 e A/B). Posteriormente, amostras clínicas de sangue e urina foram amplificadas com os mesmos iniciadores para o diagnóstico da leptospirose. Amplificações com os iniciadores G1/G2 apresentaram sensibilidade de 60,7% e especificidade de 65,8%, contra 7,1% e 94,7% obtidas com os iniciadores A/B. Sensibilidade e especificidade gerais da PCR foram 53,6% e 63,2%, respectivamente. Sessenta e seis amostras clínicas foram testadas por ELISA IgM, MAT e PCR de sangue e urina, acompanhadas de 15 amostras pareadas. A detecção do DNA das leptospiras por PCR ocorreu a partir do primeiro dia de doença, enquanto a detecção dos anticorpos pelo MAT só foi possível a partir do quinto dia. Nossos resultados sugerem que amostras de sangue são mais apropriadas para a investigação clínica da leptospiremia, frente a amostras de plasma ou soro. Essas amostras apresentaram limite mínimo de detecção de 5x10³, 5x10 elevado a 4 e 5x10 elevado a 6 células/ml, respectivamente. Apesar da amplificação parcial do gene secY ser utilizada para a detecção de leptospiras patogênicas, o seqüenciamento desses produtos de PCR não permitiu a genotipagem da cepa infectante. A PCR foi menos sensível (53,6%) do que o ELISA IgM (85,7%) ao longo do curso da doença. Entretanto, a PCR realizada em amostras de sangue ou urina permitiu o diagnóstico precoce em 71,4% dos pacientes cuja soroconversão foi confirmada pelo MAT. Assim, a PCR constitui uma ferramenta complementar na primeira fase da doença, especialmente quando não é possível detectar anticorpos específicos pelas técnicas sorológicas, permitindo a confirmação precoce da infecção e o diagnóstico diferencial de outras doenças febris.

Leptospirosis is a worldwide zoonosis of nonspecific clinical symptoms, which definitive diagnosis relies on laboratorial tests. Whole blood, plasma and serum samples in vitro contaminated were submitted to both monoplex and duplex PCR assays using previously described protocols (G1/G2 and A/B). Next, whole blood and urine clinical specimens were amplified with the same primers for diagnosis of leptospirosis. G1/G2-primed amplifications showed sensitivity of 60.7% and specificity of 65.8%, compared to 7.1% and 94.7% of the A/B-primed reactions. Overall PCR sensitivity and specificity was 53.6% and 63.2%, respectively. Sixty-six clinical samples tested by IgM ELISA, MAT and blood and urine PCR, along with 15 paired samples. PCR detection of leptospiral DNA occurred from the first day of illness, while antibodies detection by MAT was possible from the fifth day. Our results suggest that whole blood specimens are more appropriate for clinical investigation of leptospiremia, when compared to plasma or serum samples. Those samples had minimal detection limit of 5x10³, 5x10 to the power of 4 e 5x10 to the power of 6 cells/ml, respectively. Although PCR of secY gene fragment has been used for diagnosis of pathogenic leptospires, sequencing of respective amplicons does not allow genotyping of the infecting strain. PCR was less sensitive (53.6%) than IgM ELISA (85.7%) throughout the course of the disease. However, PCR performed on blood or urine samples permitted early diagnosis in 71.4% of patients whose seroconversion was confirmed by MAT. Thus, PCR constitutes a complementary tool in the first phase of the illness, especially when no specific antibodies can be detected by serological techniques, allowing early confirmation of the infection and differential diagnosis from other infectious febrile diseases.