Exophiala spinifera : polissacarídeos de parede celular, exopolissacarídeos e antígenos

Abstract

Resumo: Os fungos dematiáceos constituem um grupo grande e heterogêneo, caracterizado por possuírem um pigmento escuro, dihidroxinaftaleno melanina, na parede celular de suas células. Esses fungos estão reunidos na família Herpotrichiellaceae e podem ser patogênicos em hospedeiros vertebrados. Entre as principais doenças causadas por estes agentes, destacam-se a cromoblastomicose, ocorrida após implantação traumática destes agentes no tecido subcutâneo com formação de corpos muriformes e a feohifomicose com verificação de elementos fúngicos não diferenciados no tecido do hospedeiro. O presente trabalho objetivou caracterizar o fungo Exophiala spinifera, agente de feohifomicose, por meio de morfologia e seqüências ITS e caracterizar os polissacarídeos sintetizados por este agente visando determinar o potencial patogênico desta linhagem através de imunoensaios. O fungo foi cultivado sob agitação constante por sete dias à temperatura de 36ºC em meio mínimo (MM), que tem como fonte de carbono a glucose e em meio Czapeck- Dox (CD) cuja fonte de carbono é a sacarose. O EPS foi recuperado do meio de cultivo por centrifugação a 12.000 G e o sobrenadante foi submetido à precipitação etanólica (3:1, v/v). Esta suspensão foi mantida a -20ºC overnight e após centrifugação resultou no EPS nativo. Da biomassa foram obtidos polissacarídeos através de extração aquosa. Para caracterizar os polissacarídeos foi determinada a composição monossacarídica (Man:Gal:Glc), avaliado espectros de ressonância magnética nuclear de 13C e de GC-MS, sugerindo moléculas complexas. Objetivando a obtenção de anticorpos para testes imunológicos utilizou-se o fungo E. spinifera inativado para imunização via intraperitonial de camundongos isogênicos balb c. Os anticorpos foram testados contra os exopolissacarídeos produzidos e os polissacarídeos obtidos da parede celular, dentre as amostras a que apresentou maior atividade imunogênica foi o EPS produzido no cultivo em meio mínimo seguido do EPS produzido no meio czapeck-dox, as amostras obtidas da parede celular do fungo E. spinifera apresentaram baixa atividade imunogênica.

Abstract: The dematiaceous fungi constitute a large and heterogeneous group, characterized by having a dark pigment, dihidoxinaftaleno melanine, on their cells wall. In nature they are found mostly in the of soil and organic matter in decomposition. Many of them are fast growth saprobic, however some of them have tendency to pathogenicity in vertebrate hosts integrating the Herpotrichiellaceae family. Among the main diseases caused by these agents stand out the phaeohyphomycosis and Chromomycosis usually occurred after trauma implantation in the host tissue. The fungus Exophiala sp. is considered one of the phaeohyphomycosis and Chromomycosis agents. The present work aimed at characterizing the Exophiala spinifera fungus by means of morphology and molecule markers, which have been studied through its sequences. Aiming at achieving Exopolysaccharide (EPS) and biomass for further studies on these Macromolecules and obtaining out for immunology tests the fungus was cultivated in minimum environments (MM) and in czapeck-dox (CD) environments under constant agitation for seven days at 36ºC. The EPS was recovered out for the environment by 12.000 G centrifugation and the supernatant was submitted to Ethanolic precipitation. This suspension was kept at - 20ºC overnight and after centrifugation it results in native EPS. Polysaccharides were obtained from the biomass through watery extraction. In order to characterize the EPS the EPS-MM and EPS-CD composition was determined. Isogenics balb C mice were immunized intraperitoneal with the ESP fungus aiming at producing antibodies for immunologic tests against the EPS and wall cells of the fungus.