Desenvolvimento e validação de método por CLAE-DAD para determinação simultânea de Captopril, Hidroclorotiazida e seus compostos relacionados e avaliação da equivalência farmacêutica de medicamentos anti-hipertensivos

Abstract

Resumo: Neste trabalho os fármacos anti-hipertensivos captopril e hidroclorotiazida foram alvo de estudo por duas abordagens: (a) analítica, com o objetivo de desenvolver e validar método por CLAE-DAD para sua determinação e de seus compostos relacionados simultaneamente em comprimidos e (b) do ponto de vista do controle de qualidade com o objetivo de avaliar a equivalência farmacêutica e perfil de dissolução dos medicamentos disponíveis comercialmente que os contenham separadamente ou associados. Foi desenvolvido e validado um método rápido e econômico utilizando CLAE-DAD para quantificação de captopril (CAP), hidroclorotiazida (HCTZ) e seus principais compostos relacionados: dissulfeto de captopril (CAD), clorotiazida (CTZ) e benzotiadiazina (BTDZ). O método foi desenvolvido e validado através de um sistema cromatográfico composto por uma coluna Agilent Zorbax Eclipse XDB-Phenyl 5 ?m, 4,6 x150 mm mantida a 40°C, utilizando como fase móvel (A) ácido fosfórico 0,067% (pH 2,5) e (B) acetonitrila em modo gradiente como segue: t0-3,0 min: B=15%; t3,1-6,5 min: B=35%; t6,6-8,0 min: B=15%. O fluxo de eluição da fase móvel foi de 1,2 mL/min e o volume de injeção de 20 ?L sendo os analitos monitorados a 220 nm. O método se mostrou linear na faixa de concentração de 0,5 a 400 ?g/mL para CAP, 0,313 a 14,4 ?g/mL para CAD, 0,05 a 100,0 ?g/mL para HCTZ, 0,078 a 1,2 ?g/mL para CTZ e 0,02 a 2,4 ?g/mL para BTDZ. O ensaio de exatidão resultou em recuperações no intervalo de 98,82 - 101,31% e no ensaio de precisão intra e inter-dia DPR <5% foi obtido. A robustez do método foi verificada frente a modificações na composição da fase móvel, fluxo, temperatura e pH, sendo este crítico para a determinação de CAD. A avaliação da equivalência farmacêutica não constatou a equivalência de duas amostras de comprimidos de CAP 25 mg dentre as seis marcas de genéricos e cinco de similares avaliadas. Para comprimidos de HCTZ 25 mg essa situação foi constatada para um medicamento similar entre os dois similares e dois genéricos testados. Todas as formas farmacêuticas associadas apresentaram equivalência farmacêutica com o medicamento de referência, Lopril-D®. Os perfis de dissolução de comprimidos de CAP, HCTZ e sua associação foram comparados através da análise da variância (ANOVA), eficiência de dissolução (ED%), fator de semelhança f2 e cinética de dissolução (zero ordem, primeira ordem e Higuchi). Os resultados dos perfis caracterizaram três genéricos de CAP, entre os sete testados, como não semelhantes ao referência e entre os seis similares o mesmo aconteceu para apenas uma das marcas. Entre os dois genéricos e quatro similares de HCTZ apenas um genérico exibiu perfil satisfatório. Na forma farmacêutica associada, dos dois genéricos testados apenas um teve perfil semelhante ao Lopril-D®. Como conclusão tem-se que o novo método pode ser utilizado para a determinação simultânea dos cinco compostos citados na forma farmacêutica comprimido, sendo proposto como uma alternativa para o controle de qualidade destes produtos na indústria farmacêutica e laboratórios analíticos. Também concluímos que há uma necessidade real de maior fiscalização em relação a qualidade dos medicamentos durante seu período de comercialização. Palavras-chaves: Captopril, hidroclorotiazida, desenvolvimento analítico, validação analítica, CLAE-DAD, equivalência farmacêutica, perfil de dissolução.

Abstract: In this study, the antihypertensive drugs captopril and hydrochlorothiazide were the subject of study by two approaches: (a) analytical, aiming to develop and validate HPLC-DAD method for their determination and of their related compounds simultaneously in tablets and (b) from the standpoint of quality control in order to evaluate the pharmaceutical equivalence and dissolution profile of commercially available drugs containing them separately or combined. A quick and economical method using HPLC-DAD was developed and validated for quantification of captopril (CAP), hydrochlorothiazide (HCTZ) and its main related compounds: captopril disulfide (CAD), chlorothiazide (CTZ) and benzothiadiazine (BTDZ). The method was developed and validated through a chromatographic system composed ofa Agilent Zorbax Eclipse XDB-Phenyl column 5 ?m 4.6 x150 mm maintained at 40°C. The mobile phase consisted of 0.067% phosphoric acid (pH 2.5) (A) and acetonitrile (B) in gradient elution mode eluted at a flow rate of 1.2 mL/min as follows: t0-3.0 min: B = 15%, t3.1-6.5 min: B = 35%, t6.6-8.0 min: B = 15%. The detection wavelength was set at 220 nm and the injection volume of the sample was 20 ?L. The method was linear in the concentration range of 0.5 to 400 ?g/mL for CAP, 0.313 to 14.4 ?g/mL for CAD, 0.05 to 100 ?g/mL for HCTZ, 0.078 to 1.2 ?g/mL for CTZ and 0.02 to 2.4 ?g/mL for BTDZ. The accuracy test resulted in recoveries range of 98.82 to 101.31% and for intra and inter-day precision RSD <5% was obtained. The robustness study evaluated changes in the mobile phase composition, flow, temperature and pH, the last one is a critical factor for the CAD determination. Regarding the assessment of equivalence pharmaceutical trials did not demonstrate equivalence of two samples of captopril 25 mg tablets among the six brands of Generics and five of Similar evaluated. For hydrochlorothiazide 25 mg tablets two Similar and two Generics were tested and one Similar medicine was not equivalent to the reference. All brands of the association were pharmaceutical equivalents of their reference medicine, Lopril- D. The dissolution profiles of Generics, Similar and reference of captopril, hydrochlorothiazide and their association were compared by analysis of variance (ANOVA), dissolution efficiency (DE%), similarity factor f2 and dissolution kinetics (zero order, first order and Higuchi). The results of the profiles featured three Generics and one Similar of captopril as no similar to the reference. Among Generics and Similar medicines of hydrochlorothiazide only one Generic medicine exhibited satisfactory dissolution profile. For the medicines of the association just one of the two Generics tested was similar to Lopril-D. In conclusion we have that the new method might be used to determine the five compounds simultaneously in tablets, and presents itself as an alternative for quality control of these products in the pharmaceutical industry and that there is a real need for increased monitoring of the quality of drugs during their marketing period. Key words: Captopril, hydrochlorothiazide, analytical development, validation, HPLC, pharmaceutical equivalence, dissolution profile.