Clonagem e sequenciamento parcial do gene para o transporte de amônio em Herbaspirillum seropedicae

Abstract

Resumo : Herbaspirillum seropedicae é um microrganismo diazotrofo e endofítico, encontrado em associação com diversas gramíneas de interesse agrícola, como cana-de-açúcar, arroz, sorgo e milho. Em vista do alto gasto energético envolvido na redução do N2 a NH3, o processo de fixação de nitrogênio é altamente regulado pelos níveis de oxigênio e amônia. Existem evidências de que a captação de amônio para dentro da célula ocorre de forma ativa, através de carreadores específicos presentes na membrana celular, conhecidos genericamente como proteínas Amt. O objetivo do nosso trabalho é a identificação do gene relacionado ao transporte de íons amônio em H. seropedicae. Seqüências de aminoácidos de possíveis transportadores de amônio de Escherichía co/i, Mycobacterium tubercu/osis e Bacíllus subtilis foram analisadas e as regiões mais conservadas foram escolhidas para o planejamento de oligonucleotídeos degenerados que foram utilizados como "primers" numa reação de peR utilizando o DNA genômico de H. seropedicae como molde. O produto obtido na reação de peR foi clonado no vetor pTZ19R, originando o plasmídeo recombinante pLN1. O inserto foi sequenciado e submetido a comparação com o banco de dados, mostrando-se bastante similar as seqüências de transportadores de amônio de diversos organismos, sugerindo a presença de um gene homólogo ao transportador de amônio em H. seropedicae. Este fragmento está sendo utilizado para a clonagem do gene amt compieto deste organismo.