Confecção de lâminas de imunofluorescência indireta para diagnóstico de neosporose bovina

Abstract

Resumo : A neosporose, causada pelo Neospora caninum, é uma doença emergente que provoca distúrbios neurológicos, abortamentos e mortalidade de neonatos. É um dos principais parasitos causadores de abortamentos em bovinos no mundo e, portanto, havendo necessidade de realizar triagens nos rebanhos para detecção de animais infectados. O diagnóstico é baseado no histórico do rebanho, sinais clínicos e resultados de exames laboratoriais como a imunofluorescência indireta (IFI) e o teste imunoenzimático (ELISA) que são técnicas sorológicas mais rotineiramente utilizadas para identificar animais infectados pelo N. caninum. Em virtude dessa importância da utilização de técnicas sorológicas o TECPAR viu a necessidade de desenvolver kits de diagnósticos nacionais baseados na técnica de IFI. Para a confecção das lâminas há necessidade de padronização de todas as etapas para comercialização, visando procedimentos que possam ser facilmente reproduzidos. Inicialmente, este trabalho visou desenvolver meios para obtenção de N. caninum a partir de cultivo in vitro e manutenção in vivo para a confecção das lâminas. O cultivo do parasito foi estabelecido de forma adequada em uma nova cepa de células VERO após tentativas de adaptação com outra cepa. Além disso, a manutenção in vivo em gerbil, um modelo animal adequado para o Neospora caninum, permitiu a obtenção de grande quantidade de taquizoítas viáveis. A técnica de congelamento de N. caninum com BSA 1% não foi satisfatória, pois a lâmina confeccionada a partir do estoque congelado apresentou muitos debris celulares e a fluorescência, utilizando um soro controle positivo, apresentou-se fraca. As lâminas, que foram confeccionadas a partir de taquizoítas retirados do cultivo celular, apresentaram melhor qualidade em relação as que foram confeccionadas com taquizoítas descongelados do BSA, apresentaram fluorescência mais evidente e menor quantidade de debris celulares. Desta forma, ainda é necessário desenvolver uma padronização para o armazenamento, para que seja possível a retirada dos taquizoítas diretamente do estoque para a confecção das lâminas para comercialização, eliminando a etapa de cultivo em garrafas toda vez que necessitar fabricar um lote de lâminas.