Estudo da via alternativa do sistema complemento e de doenças autoimunes associadas em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico

Abstract

Resumo: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune multissistêmica que ocorre devido à formação de autoanticorpos patogênicos e complexos antígenoanticorpos provocando danos teciduais. Esta resulta da interação entre fatores genéticos, imunológicos e ambientais. A via alternativa (VA) do sistema complemento tem importante participação no processo inflamatório no LES e o Fator B (BF) constitui a proteína central de ativação dessa via. O presente estudo teve por objetivo avaliar a variabilidade alotípica de BF em pacientes com LES e controles sadios, visando verificar se há associação entre essa e o desenvolvimento da doença em nosso meio. Buscou-se ainda estabelecer possíveis associações com manifestações clínicas da doença, aspectos demográficos, sorológicos e comorbidades autoimunes. Foram analisadas amostras de soro de 194 pacientes com LES (180 ? e 14 ?; 17-67 anos). Grupo controle: 103 indivíduos sadios (96 ? e 7 ?; 19-81 anos) da mesma área geográfica. Os alótipos de BF foram determinados por eletroforese em gel de agarose, sob alta voltagem e refrigeração constante, seguida de imunofixação com anticorpo anti-BF humano. Para análise de co-morbidades avaliou-se os auto-anticorpos anti-endomísio (EmA-IgA), anti-célula gástrica parietal (anti-CGP), anti-músculo liso (AML), anti-mitocôndria (AMA) e anti-microssoma de fígado e rim (LKM), por técnica de imunofluorescência indireta. Os resultados obtidos não mostraram diferença significante na distribuição dos alótipos e alelos de BF entre pacientes e controles, assim como em relação ao gênero, idade de início da doença e manifestações clínicas como artrite, glomerulonefrite, serosite, manifestações cutâneas, neurológicas e hematológicas. Diminuição significativa do alelo BF*F (p=0,033; OR=0,4191) nos pacientes com anticorpos antifosfolípides (anti-cardiolipina IgG/IgM e anti-coagulante lúpico) sugeriu caráter protetor do mesmo para a presença desses anticorpos, enquanto para anticorpos anti-DNA, Sm, RNP, Ro e La não ocorreu associação. Houve aumento significativo na positividade total de auto-anticorpos nos pacientes em relação aos controles (p<0,001), especificamente na frequência do EmA-IgA (5,7%; p=0,009), que se mostrou associado à presença de lesão discoide nos pacientes (p=0,046; OR=4,104). A positividade total dos auto-anticorpos ocorreu independente da idade de início da doença e tempo de duração da mesma, mas apresentou relação significante com a elevação da idade dos pacientes. A análise de distribuição dos alótipos de BF com os auto-anticorpos pesquisados, inclusive o EmA-IgA, não mostrou associação significante. Concluindo, o estudo mostra de forma pioneira, ausência de relação entre as variantes alotípicas de BF com o desenvolvimento do LES em nosso meio, manifestações clínicas e auto-anticorpos investigados. O alelo BF*F pode ser considerado marcador de proteção ao desenvolvimento de anticorpos antifofolípides no LES. O aumento significativo de auto-anticorpos relacionados às doenças autoimunes gastrointestinais nos pacientes com LES reflete a predisposição destes a desenvolver tais co-morbidades.

Abstract: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a multisystem autoimmune disease that occurs due to the formation of pathogenic autoantibodies and antigen-antibody complexes causing tissue damage. This results from the interaction between genetic, immunological and environmental factors. The alternative pathway (AP) of the complement plays an important involvement in the inflammatory process in SLE and Factor B (BF) is the central protein activation of this pathway. The present study aimed to evaluate the allotypic variability of BF in SLE patients and healthy controls, in order to verify if there is an association between these and the development of disease among us. We attempted also to establish possible associations with clinical, demographic and serological features of the disease and autoimmune co-morbidities. Serum samples of 194 SLE patients (180 ? and 14 ?; 17-67 years) were evaluated. Control group: 103 healthy individuals (96 ? and 7 ?; 19-81 years) from the same geographic area. The BF allotypes were determined by high-voltage agarose gel electrophoresis, under constant cooling, followed by immunofixation with anti-human BF antibody. For analysis of comorbidities were evaluated autoantibodies antiendomysium (IgA-EmA), anti-gastric parietal cell (anti-CGP), anti-smooth muscle (AML), anti-mitochondrial (AMA) and anti-liver and kidney microsomal (LKM), by indirect immunofluorescence. The results showed no significant differences in the distribution of phenotypes and BF alleles between patients and controls, as well as in relation to gender, age of onset and clinical manifestations such as arthritis, glomerulonephritis, serositis, cutaneous, neurological and hematological. Significant decrease in BF*F allele (p= 0.033, OR= 0.4191) in patients with anti-phospholipid antibodies (anti-cardiolipin IgG /IgM and lupus anticoagulant) suggested protective character of the same for the presence of these antibodies, while for anti-DNA, Sm, RNP, Ro and La there was no association. A significant increase in the total positivity of autoantibodies was observed in patients compared to controls (p <0.001), specifically in the frequency of IgA-EmA (5.7%, p: 0.009), which was associated with the presence of discoid lesions in patients (p: 0.046, OR: 4.104). Total positivity of autoantibodies was independent of age of onset and duration of the disease, but showed a significant relationship with increasing age of patients. The analysis of distribution between BF allotypes and autoantibodies, including IgA-EmA, showed no significant association. In conclusion, this study shows in a pioneering way, no relationship between the allotypic variants of BF and the development of SLE in our midst, nor with clinical manifestations and autoantibodies investigated. The BF*F allele can be considered a marker of protection to the development of antiphospholipid antibodies in patients. The significant increase of autoantibodies associated with autoimmune gastrointestinal diseases in SLE patients reflects the predisposition of developing such comorbidities.