Reação em cadeia da Polimerase em comparação com o teste de Imunofluorescência indireta (IFI) e Elisa (Enzimaimunoensaio) no diagnóstico para a doença de Chagas

Abstract

ResumoA doença de Chagas é uma enfermidade causada por Trypanosoma cruzi e que se apresenta de forma assintomática ou por manifestações cardíacas, digestivas ou neurológicas. Os testes sorológicos para diagnóstico são sensíveis, mas inespecíficos. A detecção direta do parasito no sangue por hemocultura é específica, mas é de baixa sensibilidade. Métodos como a Reação em cadeia da Polimerase (PCR) tem sido proposta como uma alternativa para a detecção de T. cruzi no sangue. Visando comparar a sensibilidade dos métodos sorológicos (Imunofluorescência Indireta - IFI e Ensaio imunoenzimático - ELISA) e molecular (PCR) para confirmação da doença de Chagas em pacientes com cardiopatia, megaesôfago, megacolon, doença indeterminada e aguda foi desenvolvido este trabalho. Foram selecionados 77 pacientes para o estudo, 55 tiveram histórico epidemiológico para doença de chagas e destes 48 (87,27%) e 52 (94,54%) tiveram sorologia positiva por ELISA e IFI respectivamente. Para a técnica de PCR dois pares de iniciadores específicos para T. cruzi (TCZ1/TCZ2, Tc24T1/Tc24T2) e um par de iniciadores para T. rangeli (R1/R2) foram avaliados. Os iniciadores TCZ1/TCZ2 apresentaram sensibilidade de 96,1% e poderão ser facilmente utilizados no laboratório como diagnóstico de certeza aliados aos iniciadores R1/R2 de T. rangeli e à sorologia. Para os iniciadores Tc24T1/Tc24T2 observou-se amplificação de DNA de Leishmania braziliensis e não amplificação de DNA de T. cruzi em amostras sanguíneas. Nenhum paciente apresentou PCR positiva para T. rangeli. Para o diagnóstico laboratorial de pacientes rejeitados em bancos de sangue com sorologia positiva para doença de Chagas, a PCR se torna excelente metodologia para dar suporte aos LACENs para confirmar ou infirmar o diagnóstico. Tais pacientes normalmente não possuem clínica e a PCR seria mais um teste para auxiliar no diagnóstico.

Abstract: Chagas’s disease is a disease caused by Trypanosoma cruzi that occurs either in an asymptomatic form or with cardiac, digestive, or neurological manifestations. The serological diagnostic tests are sensitive but nonspecific. The direct detection of the parasite in blood by hemoculture is specific, but it has low sensitivity. Methods like the Polymerase Chain Reaction (PCR) have been proposed as an alternative way of detecting T.cruzi in blood. The present work was developed aiming at comparing the sensitivity of serological methods (Indirect Immunofluorescence-IFI and Immunoenzymatic Assay-ELISA) and molecular methods (PCR) in order to confirm Chagas’s disease in patients with cardiopathies, megaesophagus, magacolon, and indefinite and acute illnesses. Seventy-seven patients were selected for the study, 55 of which had an epidemiological history for Chagas’s disease and 48 (87.27%) and 52 (94.54%) out of them had positive serology for ELISA and IFI, respectively. For the PCR technique, two pairs of specific primers for T.cruzi (TCZ1/TCZ2, Tc24T1/Tc24T2) and a pair of primers for T. rangeli (R1/R2) were evaluated. Primers TCZ1/TCZ2 presented 96.1% sensitivity and can easily be used in laboratory combined with serology. PCR using primers Tc24T1/Tc24T2 showed bands only in samples obtained from parasites’ culture; but when applied to blood samples of patients all samples were negative. Furthermore, this primer showed amplification to Leishmania braziliensis’s DNA. No patient presented positive PCR for T. rangeli. For laboratory diagnosis of Blood Banks’ rejected patients with positive serology for Chagas’s disease, the PCR becomes an excellent methodology for supporting the LACENs in diagnosis confirmation or infirmation. Such patients normally do not have clinical symptoms and the PCR would be another tool that could help in the diagnosis.